摘要:Cell Ranger是由10x Genomics开发的一套用于处理单细胞RNA测序数据的软件。它拥有一系列的工具链,可以对单细胞测序数据进行解析和分析,包括质量控制、比对、细胞分群、基因表达矩阵生成等功能。以下是使用Cell Ranger的一般步...
Cell Ranger是由10x Genomics开发的一套用于处理单细胞RNA测序数据的软件。它拥有一系列的工具链,可以对单细胞测序数据进行解析和分析,包括质量控制、比对、细胞分群、基因表达矩阵生成等功能。以下是使用Cell Ranger的一般步骤,假设你已经安装并配置好环境:
1. 数据准备: 在你开始运行Cell Ranger之前,确保你的原始测序数据(通常是FastQ文件)已获得,并且你获取了相应的参考基因组数据。10x Genomics官网上提供了常见物种的参考基因组。
2. 运行cellranger mkfastq:
如果你使用的测序仪输出的是BCL文件,可以使用`cellranger mkfastq`将BCL文件转为FastQ文件。例如:
```bash
cellranger mkfastq --id=SampleID --run=/path/to/Illumina_Run --csv=/path/to/SampleSheet.csv
```
此步骤将创建代表每个样本的FastQ文件。
3. 运行cellranger count:
这一步将FastQ文件关联的单细胞数据处理成基因表达矩阵,并与参考基因组比对。如果只处理单个样本,命令如下:
```bash
cellranger count --id=SampleID \
--fastqs=/path/to/fastq_files \
--sample=SampleName \
--transcriptome=/path/to/reference_genome
```
该命令将输出一个包含基因表达矩阵、细胞质控指标、UMI计数等在内的数据文件。
4. 查看结果:
处理结束后,结果会存放在`outs`文件夹中。你可以用10x Genomics提供的`loupe browser`来可视化这些结果,或导入到其他解析软件如Seurat、Scanpy中作进一步分析。
这只是一个基本操作流程,你可以根据具体需求调整参数和步骤。详细文档和更多配置可以访问10x Genomics官网获得。